Диагностика инфекционных болезней импортируемых в Россию свиней

Василий Ковалишин,
ведущий  научный сотрудник, лаборатория диагностики особо опасных инфекций, Федеральный центр охраны здоровья животных (ФГУ «ВНИИЗЖ»)

С 2005 года свиноводческие хозяйства России интенсивно закупают племенных свиней зарубежной селекции из Канады и европейских стран.
Согласно ветеринарным требованиям, к ввозу в Российскую Федерацию (РФ) допускаются здоровые племенные свиньи, рожденные и выращенные в стране-экспортере, не вакцинированные против классической чумы свиней (КЧС) и болезни Ауески (БА). В период карантина страна-экспортер проводит диагностические исследования в государственной ветеринарной лаборатории на КЧС, репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС), бруцеллез, БА, хламидиоз, вирусный трансмиссивный гастроэнтерит (ВТГС), туберкулез, везикулярную болезнь свиней (ВБС), парвовирусную инфекцию (ПВИС), атрофический ринит и, по требованию импортера, на другие инфекционные болезни. К ввозу в Россию допускаются только те племенные животные, которые показали отрицательные результаты во всех диагностических тестах. Несмотря на это, некоторые хозяйства уже в России проводят выборочные исследования сывороток крови от закупленных животных на наличие антител к перечисленным патогенам и некоторым другим инфекционным агентам, не входящим в утвержденный список.
Задачей ветеринарных лабораторий Российской Федерации является проведение мониторинга как по выше указанным инфекциям, так и по другим заболеваниям актуальным как для Российской Федерации, так и для стран – экспортеров племенных свиней. Для этих целей необходимо проводить достоверные широкомасштабные лабораторные исследования, направленные на обнаружение широкого спектра инфекционных агентов, актуальных для свиноводства.
Проводить такие лабораторные исследования районными, областными и республиканскими ветеринарными лабораториями не всегда представляется возможным из-за слабого технического оснащения лабораторий, низкого уровня квалификации специалистов, а так же из-за отсутствия стандартных единых тест-систем для всех лабораторий Российской Федерации.
В нашем центре за последние годы проведена большая работа по разработке и совершенствованию современных высокочувствительных и высокоспецифичных тест-систем ПЦР и ИФА.
В настоящее время в центре разработана и применяется комплексная лабораторная диагностика, включающая как традиционные, так и современные тест-системы.
Схема 1.
ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХх





Однако в качестве базовых методов используются ПЦР–секвенирование и ИФА.
Для проведения мониторинга по инфекционным болезням импортируемых в Россию свиней разработаны и используются около 40 ПЦР тест-систем.


Перечень инфекционных агентов болезней свиней, тестируемых во ВНИИЗЖ методами ПЦР-секвенирования:
Вирус ящура
Вирус ВБС
Вирус КЧС
Вирус Болезни Ауески
Вирус РРСС
Парвовирус
Коронавирусы:
Вирус ТГС
Вирус ЭДС
Респираторный коронавирус
ГА-коронавирус
Энтеровирусы, в т.ч.:
Болезнь Тешена
Цирковирусы
Аденовирусы
Вирус гриппа
Вирус ЭМК
Цитомегаловирус(ЦМВ)
Лимфотропный герпесвирус(ЛГВ)
Вирус гепатита Е
Ротавирус
Вирус оспы
Pasteurella multocida
Haemophilus parasuis
Actinobacillus pleuropneumoniae
Микоплазмы, в том числе:
M. hyorhinis
M. hyopneumoniae
Erysipelothrix rhusiopthiae
Уреаплазмы
Хламидиии
Колибактерии
Clostridium perfringes
Сальмонеллы
Стрептококки
Стафиллококки
Clostridium difficile
Лептоспиры
Листериии
Бордетеллы
Актиномицеты
Lawsonia intracellularis
Простейшие
Некробактерии


А также около 20 тест-систем ИФА.

Перечень инфекционных заболеваний свиней,
тестируемых во ВНИИЗЖ серологическими методами (ИФА и др.)

Ящур
ВБС
КЧС
РРСС
Цирковирус-2
Болезнь Ауески
Грипп
ПарвоВИС
РотаВИС
КоронаВИС (респират.)
ТГС, ЭДС
Гепатит Е
Пастереллёз
Сальмонеллёз
Актинобациллёз
Гемофилёз
Микоплазмоз
(М. hyopneumoniae)
Лептоспироз
Хламидиоз


ПЦР является высокочувствительной и высокоспецифической реакцией, способной обнаружить инфекционный агент в концентрации, которую невозможно обнаружить другими традиционными методами.
Секвенирование. Сущность метода заключается в изучении генетической характеристики инфекционного агента и используется для определения видовой и штаммовой принадлежности патогена, а также для определения происхождения агента и источника инфекции.
Для ускорения лабораторной диагностики в центре разработаны и широко используются мультиплексная ПЦР, сущность которой заключается в одновременном определении нескольких инфекционных агентов в одной пробе.
Мультиплексная ПЦР также используется для определения типовой и видовой принадлежности бактерий.
Схема 2.

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХх







Схема 3.

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХ


Для определения роли патогенов в инфекционной патологии необходимо определять патогенные свойства и концентрацию инфекционных агентов. Патогенные свойства ряда бактерий (Е.coli, Clostridium perfringens, стрептококки и др.) определяются с помощью мультиплексной ПЦР, направленной на обнаружение факторов патогенности (токсинов Sta, STb, LT и адгезинов F41, K88, K99, и других).
Для определения концентрации инфекционных агентов разработаны и используются количественные ПЦР тест-системы (ПЦР в режиме реального времени).
С помощью разработанных тест-систем проведены лабораторные исследования более 4000 проб патматериала от свиней разных возрастных групп с респираторной, диарейной и репродуктивной патологией, результаты которых отражены на диаграммах 1, 2, 3.




Диаграмма 1.

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХх



Диаграмма 2.

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХх






Диаграмма 3

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХ





Анализируя результаты лабораторных исследований патматериала методом ПЦР, можно заключить следующее:
1. При респираторной патологии ведущую роль играют вирусы РРСС, ЦВС 2-го типа, микоплазмы, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae и Pasteurella multocida.
2. При кишечной патологии ведущую роль играют Clostridium perfringens, Clostridium difficile и энтеротоксигенная кишечная палочка.
3. При репродуктивной патологии ведущее место занимают стрептококки и вирус РРСС.
Однако следует отметить, что и другие инфекционные агенты  могут играть существенную роль в инфекционной патологии свиней.

В период с 2005 по 2008 годы нами были исследованы сыворотки крови племенных свиней, завезенных в свиноводческие хозяйства Российской Федерации из 13 стран Европы и Канады.
По запросу хозяйств-импортеров на наличие антител к вирусу РРСС исследовали 14376 сывороток, вирусу КЧС – 11344, ЦВС-2 – 3879, БА – 15817 и M. hyopneumoniae – 6073 пробы. Исследования проводили с использованием ИФА тест-систем, разработанных в ФГУ «ВНИИЗЖ», и коммерческих наборов «Ceditest PRV» (Нидерланды), «Chekit CSF-SERO» (Германия).

Таблица.

Результаты исследования сывороток крови
от импортированных племенных свиней
на наличие антител к различным инфекционным агентам

ХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХХ


Примечание: исследованных / положительных сывороток

Как видно из таблицы, импортированные свиньи из Канады и стран Европы, не имели специфических антител к вирусам классической чумы свиней, репродуктивно-респираторного синдрома, болезни Ауески и трансмиссивного гастроэнтерита (ТГС). Тогда как к цирковирусу 2-го типа, Mycoplasma hyopneumoniae,  респираторному коронавирусу свиней (РКВС), вирусу гриппа свиней (ВГС) и Actinobacillus pleuropneumoniae (АПП) животные были серопозитивными (59,6%, 9%, 60,5%, 21,0% и 17,0%, соответственно). Антитела к цирковирусу 2-го типа были обнаружены у исследованных животных из свиноводческих хозяйств Канады и стран Европы, что свидетельствует как о широком распространении ЦВС-2, так и о трудностях борьбы с цирковирусной инфекцией свиней. Антитела к вирусу гриппа обнаружены у свиней из Канады и Франции, тогда как антитела к АПП в сыворотках крови от свиней этих стран не выявляли.
Согласно «Ветеринарным требованиям при импорте в РФ племенных и пользовательных свиней» ЦВС-2 не входит в обязательный список патогенов, и серодиагностика на эту инфекцию проводится только по требованию импортера.
Антитела к  Mycoplasma hyopneumoniae обнаруживали в сыворотках крови свиней из Франции, Польши, Дании, Англии, Германии, Литвы и Испании. Не выявляли специфических антител к Mycoplasma hyopneumoniae в сыворотках крови  животных из Канады и Чехии. Необходимо также отметить, что M. hyopneumoniae не входит в обязательный список патогенов, от которых должны быть свободны ввозимые в Россию свиньи, и поэтому нарушений со стороны экспортера в данном случае нет.
Таким образом, проведенные нами диагностические исследования показали, что ввозимые из-за границы племенные свиньи не имеют антител к вирусам РРСС, КЧС и БА, однако многие животные серопозитивны в отношении ЦВС-2 и M. hyopneumoniae.
Однако следует отметить, что в странах-экспортерах имеются разные категории хозяйств (племенные или товарные) с разным иммунным статусом животных. В связи с этим при закупке племенных свиней необходимо учитывать категорию свиноводческих хозяйств.

Выводы
Страны-экспортеры поставляют в Россию племенных свиней, удовлетворяющих ветеринарным требованиям РФ, что подтверждается нашими исследованиями.
Источник: Ежедневное аграрное обозрение, www.agroobzor.ru